Fasa bergerak adalah bersamaan dengan fasa cecair darah, dan terdapat pelbagai perkara yang perlu diberi perhatian semasa penggunaan. Antaranya, terdapat beberapa "perangkap" yang mesti diberi perhatian.
01. Ukur pH fasa bergerak selepas menambah pelarut organik
Jika anda mengukur pH dengan bahan tambahan organik, pH yang anda perolehi akan berbeza daripada sebelum menambah pelarut organik. Walau bagaimanapun, perkara yang paling penting ialah konsisten. Jika anda sentiasa mengukur pH selepas menambah pelarut organik, pastikan anda menyatakan langkah anda dalam kaedah yang anda gunakan supaya orang lain akan mengikuti kaedah yang sama. Kaedah ini tidak 100% tepat, tetapi sekurang-kurangnya ia akan memastikan kaedah itu konsisten. Ini mungkin lebih penting daripada mendapatkan nilai pH yang tepat.
02. Tiada penimbal digunakan
Tujuan penimbal adalah untuk mengawal pH dan mengelakkannya daripada berubah. Banyak kaedah lain mengubah pH fasa mudah alih, yang boleh menyebabkan perubahan dalam masa pengekalan, bentuk puncak dan tindak balas puncak.
Asid format, TFA, dsb. bukan penampan
03. Tidak menggunakan penimbal dalam julat pH biasa
Setiap penimbal mempunyai lebar julat unit pH 2, di mana ia memberikan kestabilan pH terbaik. Penampan di luar tetingkap ini tidak akan memberikan rintangan yang berkesan terhadap perubahan pH. Sama ada gunakan penimbal dalam julat yang betul, atau pilih penimbal yang meliputi julat pH yang anda perlukan.
04. Tambah penimbal kepada larutan organik
Mencampurkan larutan penimbal dengan fasa organik berkemungkinan besar akan menyebabkan pemendakan. Dalam banyak kes, walaupun hujan telah berlaku, ia masih sukar untuk dikesan. Ingat untuk sentiasa menambah larutan organik pada fasa akueus, yang boleh mengurangkan peluang kerpasan penimbal.
05. Campurkan kecerunan kepekatan daripada 0% dengan pam
Pam yang tersedia hari ini boleh mencampurkan fasa mudah alih dan degas sebaris dengan berkesan, tetapi tidak semua orang yang menggunakan kaedah anda akan mempunyai pam berkualiti tinggi. Campurkan A dan B ke dalam satu larutan dan jalankannya 100% sebaris.
Sebagai contoh, 950 ml campuran permulaan organik boleh disediakan dengan mencampurkan dengan 50 ml air. Kelebihan ini ialah ia boleh mengurangkan kebolehubahan antara HPLC dan mengurangkan kemungkinan buih dan pemendakan dalam sistem. Perlu diingat bahawa nisbah campuran pam adalah 95:5, yang tidak bermakna masa pengekalan pra-campuran dalam botol juga 95:5.
06. Tidak menggunakan asid (bes) ubah suai yang betul untuk menukar penimbal
Hanya gunakan asid atau bes yang membentuk garam penimbal yang anda gunakan. Sebagai contoh, penimbal natrium fosfat hendaklah disediakan dengan hanya asid fosforik atau natrium hidroksida.
07. Tidak menyatakan semua maklumat tentang penimbal dalam kaedah, seperti menambah 5g daripadanatrium fosfat kepada 1000ml air.
Jenis penimbal menentukan julat pH yang boleh ditimbal. Kepekatan yang diperlukan menentukan kekuatan penimbal. 5 gram atau natrium fosfat kontang dan 5 gram monosodium fosfat monohidrat mempunyai kekuatan penimbal yang berbeza.
08. Menambah pelarut organik sebelum diperiksa
Jika kaedah sebelumnya menggunakan penyelesaian penimbal untuk garis dasar B, dan kaedah anda menggunakan penyelesaian organik untuk garis dasar B, anda diharapkan dapat menyelesaikan penimbal dalam tiub pam dan kepala pam.
09. Angkat botol dan kosongkan titisan terakhir
Terdapat kemungkinan besar anda tidak akan mempunyai fasa mudah alih yang mencukupi untuk melengkapkan keseluruhan larian dan sampel anda akan berasap. Selain kemungkinan membakar sistem pam dan lajur, fasa bergerak akan tersejat sepenuhnya dan fasa mudah alih di bahagian atas botol akan berubah.
10. Gunakan fasa mudah alih penyahgas ultrasonik
Perkara yang paling penting ialah memastikan semua garam penimbal dibubarkan, tetapi ini adalah cara paling teruk untuk menyahgas dan akan memanaskan fasa mudah alih dengan cepat, menyebabkan komponen organik tersejat. Untuk menyelamatkan masalah yang tidak perlu kemudian, luangkan masa lima minit untuk menapis vakum fasa mudah alih anda.
Masa siaran: Ogos-27-2024